З початком Другої світової війни діяв західніше Британських островів. Підводний човен вийшов у море ще 23 серпня та вийшов з Вільгельмсгафена у визначений район Атлантичного океану, де перебував у готовності до воєнних дій. 13 вересня1939 року поблизу острова Торі U-27 потопив перше судно — британський траулерDavara, а 16 вересня1939 року субмарина провела атаку на ще один британський траулер Rudyard Kipling.
20 вересня1939 року британські есмінці«Форчун», «Фокнор» (які шість днів тому затопили U-39) і «Форестер» проводили протичовнові заходи, розшукуючи ворожі субмарини, коли вийшли в район патрулювання німецького човна. U-27 випустив три торпеди, але всі пройшли мимо цілей, тоді британці атакували його глибинними бомбами, примусивши спливти на поверхню. Німецький екіпаж у кількості 38 осіб був взятий у полон, а човен був затоплений, ставши другим німецьким підводним човном, що були затоплені в роки війни.
Gröner, Erich; Jung, Dieter; Maass, Martin (1991). Die Schiffe der Deutschen Kriegsmarine und Luftwaffe 1939-45 und ihr Verbleib von Erich Gröner. Bearbeitet von Dieter Jung und Martin Maass. München, J. F. Lehmanns Verlag, (1972).
М. Э. Морозов, В. А. Нагирняк Стальные акулы Гитлера. Серия «VII». — М.: «Коллекция», «Яуза», «Эксмо», 2008. — 144 с. — ISBN 978-5-699-29092-5.
Snyder, Gerald (1976), The Royal Oak Disaster, Presidio Press, ISBN 0-89141-063-5
Блэйр К.Подводная война Гитлера (1939—1942): Охотники = Clay Blair: Hitler's U-Boat War. T. 1: The Hunters, 1939—1942. Nowy Jork: Random House, 1996 / Пер. с англ. A.B. Николаева, И.А. Николаева. — М. : ООО «Издательство АСТ»; СПб.: Terra Fantastica, 2001. — 640 с. — (Военноисторическая библиотека) — 7000 прим. — ISBN 5-17-004952-8.(рос.)