Barkley memulai karier hukumnya dengan menjadi jaksa (1905-1909) dan hakim (1905-1909) di McCracken County. Ia mulai membangun reputasi sebagai orang progresif yang berpihak pada kaum petani. Gaya orasinya sangat merakyat dan enerjik yang menjadikannya sebagai kekuatan di kalangan Partai Demokrat setempat.
Barkley terpilih sebagai Wakil Presiden ke-35, mendampingi Presiden Harry Truman, mulai Januari1949 sampai Januari 1953. Saat dilantik ia berusia 71 tahun dan merupakan Wapres tertua dalam sejarah AS. Barkley juga pernah dianugerahi Medali Emas Kongres tahun 1949.