Il campionato italiano di calcio di Eccellenza regionale 2000-2001 è stato il decimo organizzato in Italia. Rappresenta il sesto livello del calcio italiano.
Questi sono i gironi organizzati dal comitato regionale della Sicilia.
Al campionato venne iscritto anche il Trapani, fallito nelle categorie superiori. Il Città di Trapani invece ha acquisito il titolo del Paceco, così come il Marsala 2000 quello del Don Bosco Partinico e il Misterbianco quello del Gravina.
Il girone A comprendeva inizialmente anche la Panormus, classificatasi prima l'anno precedente ma non promossa per un presunto illecito sportivo. La squadra palermitana fu riammessa in Serie D soltanto a ottobre, dopo che si era già disputata la prima giornata in cui la Panormus aveva battuto il Cinisi 5-2. Dopo il ripescaggio quella gara fu annullata e il girone rimase composto da 17 squadre.[1]
Dopo i play-out nella stagione precedente, esordiscono in questa stagione anche i play-off, disputati per stabilire la squadra di ogni girone che avrebbe partecipato agli spareggi promozione nazionali.
Legenda: Pro Favara promosso in Serie D 2001-2002. Alcamo ammesso ai play-off nazionali. Valderice e Cinisi retrocessi in Promozione 2001-2002 dopo play-out. Aragona retrocesso in Promozione 2001-2002.
Legenda: Belpasso promosso in Serie D 2001-2002. Siracusa ammesso ai play-off nazionali. Scicli, Canicattini e Rosolini retrocessi in Promozione 2001-2002 dopo play-out. Taormina e Leonzio retrocessi in Promozione 2001-2002.