Ia menghadiri SD program klasik di Osijek (Kroasia), mengubah cita-citanya dari pendeta untuk belajar ilmu teknik. Memilih kimia, mungkin karena ia mengharap mendapat kedudukan di pabrik gula yang baru dibangun di Osijek. Namun ia berubah pikiran ke Sekolah Tinggi Teknik di Karlsruhe, mempelajari kimia organik dan fisika kimia di bawah bimbingan Fritz Haber. Bersama Hermann Staudinger, Ružička pindah ke Zurich dan menjadi asistennya.