T7 RNA polimerasi

Una T7 RNA polimerasi (blu) mentre produce una molecola di mRNA (verde) a partire da uno stampo di DNA (arancione).[1]

La T7 RNA polimerasi è una RNA polimerasi (numero EC 2.7.7.6[2]) che catalizza la formazione di RNA in senso 5'→ 3'. La T7 polimerasi è estremamente specifica nel riconoscimento del promotore e trascrive solo DNA proveniente da fago T7, un virus che infetta solo batteri, o DNA contenente promotori di T7. La T7 polimerasi ha un peso molecolare di 99 kDa.

Confronto con altre polimerasi

La T7 polimerasi, come la maggior parte delle altre polimerasi, richiede anche uno stampo di DNA e ioni Mg^2+ come cofattori per la sintesi di RNA. L'enzima è fortemente stimolato dalla presenza di albumina di siero bovino (BSA) o da spermidina. A differenza delle RNA polimerasi batteriche, la T7 polymerase non è inibita dall'antibiotico rifampicina.

Utilizzi

La T7 polimerasi è comunemente usata per trascrivere DNA clonato in vettori contenenti due promotori fagici con orientamenti opposti. L'RNA può essere così sintetizzato selettivamente da entrambi i filamenti del DNA inserito con differenti polimerasi. Con questo sistema è possibile ottenere filamenti di RNA a singolo filamento marcati in modo omogeneo.

Note

1. Realizzata a partire dalla entry PDB 1MSW
2. (EN) 2.7.7.6, in ExplorEnz — The Enzyme Database, IUBMB.

Bibliografia

• Sastry SS, Ross BM. "Nuclease activity of T7 RNA polymerase and the heterogeneity of transcription elongation complexes." J Biol Chem 272 (1997 Mar 28): 8644-52.

Collegamenti esterni

• (EN) Enzimologia della T7 RNA Polimerasi, su academic.brooklyn.cuny.edu.