Согласно житию, Исидор родился в окрестностях города Бранденбурга в славянской семье католического вероисповедания.
Приняв подвиг юродства, Исидор пешком дошёл до Ростова и принял там православие. Житие сообщает о многочисленных чудесах Исидора и о его аскетическом образе жизни. Известны были и его предсказания, за сбываемость которых его прозвали Твердисловом. Исидор скончался в Ростове в 1474 году и был похоронен на месте хижины, где он жил. Позднее над ней была построена Церковь Вознесения Господня (Церковь Исидора Блаженного на валах), под стенами которой мощи Блаженного находятся до настоящего времени.
Почитание Исидора началось уже в XV веке (то есть сразу после его смерти). Иван Грозный считал его одним из великих русских чудотворцев (Исидору приписывалось освобождение в 1563 году города Полоцка от польских войск). В «Уставе церковных обрядов Московского Успенского собора» (1636) указывается: «Мая в 14-й день Исидору Ростовскому благовест в лебедь, трезвон средний».
Согласно иконописному подлиннику, Исидор «подобием рус, власы велики, брада аки Никиты мученика, подоле, риза на нем едина разодрана серодикая, правое плечо наго, руки крестообразно, ноги голы».
Гладкова О. В. Древнерусский святой, пришедший с Запада (о малоизученном «Житии Исидора Твердислова, ростовского юродивого») // Древнерусская литература: тема Запада в XIII—XV вв. и повествовательное творчество. Колл. монография / Отв. ред. О. В. Гладкова. — М., 2002. — С. 167—210 (исследование, текст и перевод).
Гладкова О. В. Странность юродивого («западная тема» и агиографический канон в Житии Исидора Твердислова) // О славяно-русской агиографии. Очерки. — М., 2008. — С. 69—82.
Гладкова О. В. «Странность» юродивого (о малоизученном «Житии Исидора Твердислова») // Канонизация святых на Руси. Материалы VI Рос. науч. конф., посв. памяти Святителя Макария (10—12 июня 1998 года). — Можайск, 1998. — Вып. 4. — С. 393—400.
Голод Е. В. Рукописная традиция Жития Исидора Твердислова и почитание святого в конце XV — начале XVI вв. // IX конф. молодых учёных «Вопросы славяно-русского рукописного наследия» (к 75-летию отдела древнерусской литературы). — СПб., 2008.
Житие Исидора Твердислова, ростовского юродивого / Пер. и прим. О. В. Гладковой // Слово Древней Руси / Сост., вступ. ст. О. В. Гладковой. — М., 2000. — С. 377—387.
Исидорова З. Н. О редакциях жития св. Исидора Твердислова // Опыты по источниковедению. Древнерусская книжность. — СПб., 2001. — Вып. 4. — С. 96—110 (исследование и текст).