Latar Belakang: Kewaspadaan universal adalah upaya pengendalianinfeksi di rumah sakit. Pada tahun 2013 masih terdapat kejadian infeksinosokomial di Rumah Sakit Umum Dr. Soedarso yaitu yang terbanyak padaruangan bedah (7 kasus), ruang anak (7 kasus), ruang kebidanan (7 kasus)dan ruang ICU (11 kasus). Petugas kesehatan khususnya perawat setiapharinya 7-8 jam melakukan kontak langsung dengan pasien. Perilakumencuci tangan perawat yang kurang adekuat akan memindahkanorganisme – organisme bakteri patogen secara langsung kepada hospesyang menyebabkan infeksi nosokomial di semua jenis lingkungan pasien.Tujuan: Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui gambaran pengetahuandan perilaku perawat tentang kewaspadaan universal di Rumah SakitUmum Daerah Dr. Soedarso Pontianak Kalimantan Barat. Metodologi:  Penelitian ini menggunakan metode deskriptif denganpendekatan cross sectional. Penelitian ini dilakukan pada 17 Mei-8 Juni2014. Total sampel sebanyak 71 responden. Pengumpulan datamenggunakan instrumen kuesioner dan diambil dengan metode totalsampling. Data dianalisis dengan analisis deskriptif. Hasil: Hasil gambaran pengetahuan menunjukan 54,93% respondenmemiliki pengetahuan baik, 45,07% memiliki pengetahuan yang cukup baik,dan hasil gambaran perilaku menunjukan 91,55% responden memilikiperilaku yang baik, 7,04% memiliki perilaku yang cukup baik, 1,41%memiliki perilaku yang kurang.Kesimpulan: Tingkat pengetahuan dan perilaku perawat tentangkewaspadaan universal di Rumah Sakit Umum Daerah Dr. Soedarsosebagian besar dalam kategori baik. Diharapkan dari pihak Rumah SakitUmum Daerah Dr. Soedarso untuk memberikan pelatihan berkalamengenai kewaspadaan universal serta mensosialisasikan SOP yangterkait kewaspadaan universal.Kata Kunci: Kewaspadaan Universal, Pengetahuan, Perilaku 1. Program Studi Pendidikan Dokter, Fakultas Kedokteran, UniversitasTanjungpura, Pontianak, Kalimantan Barat (jikowgultom@gmail.com) 2. Departemen Kesehatan Komunitas, Fakultas Kedokteran, UniversitasTanjungpura, Pontianak, Kalimantan Barat 3. Departemen Gizi, Fakultas Kedokteran, Universitas Tanjungpura,Pontianak, Kalimantan Barat