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Un carré de papier buvard imbibé de substrat est posé sur une lame de verre ; puis des fragments de colonies sont fixés sur la lame de verre avec une pipette pasteur boutonnée.
si le papier présente une tache violette : le substrat a été oxydé, la bactérie possède une oxydase.
Si le papier reste incolore : il n'y a pas eu de réaction, la bactérie ne possède pas l'enzyme.