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Matteo Spreafico devient coureur professionnel en 2017 au sein de l'équipe Androni Giocattoli, qui le recrute pour deux ans[1].
Au cours de la saison 2020, il rejoint l'équipe Vini Zabù-KTM (UCI ProTeam) avec laquelle il dispute son premier Tour d'Italie. Le 22 octobre 2020, il y est suspendu après un contrôle antidopage anormal effectué par l'UCI. Les taux anormaux relevés d'ostarine (agent anabolisant) lors des 12e et 13e étapes entraînent sa suspension provisoire[2]. En mai 2021, il est suspendu trois ans, jusqu'au 21 octobre 2023[3].