E-book interaktif materi ekosistem merupakan bahan ajar berupa media elektronik yang digunakan untuk mempelajari materi ekosistem disekolah. E-book interaktif materi ekosistem melatihkan kemampuan berpikir kritis siswa disekolah. Penelitian ini bertujuan untuk mendeskripsikan kelayakan teoritis e-book interaktif materi ekosistem untuk melatihkan keterampilan berpikir kritis siswa kelas X SMA. Penelitian ini menggunakan odel pengembangan 4D (define, design, develop, dan disseminate). Teknik pengambilan data dilakukan dengan menggunakan metode validasi oleh dua pakar biologi bidang pendidikan dan materi ekosistem, serta satu guru biologi SMA. Teknik analisis data dilakukan secara deskriptif kualitatif. Hasil kelayakan teoritis e-book ditinjau berdasarkan tiga komponen yaitu komponen penyajian, isi, dan kebahasaan memperoleh nilai rata-rata 3,87 dengan persentase 96,9% menunjukkan e-book interaktif sangat layak digunakan dalam pembelajaran biologi. Kata Kunci: Kelayakan teoritis, e-book interaktif, berpikir kritis, ekosistem.